一、怎样提取人的dna
一、人的dna提取
人体DNA是一种重要的生物信息分子,它蕴含着我们的遗传信息和基因组成。在科学研究和医学领域,人体DNA的提取是一项关键的技术,它可以用于诊断疾、研究基因变异、进行亲子鉴定等多个方面。下面将介绍人体DNA提取的方法和应用。
人体DNA提取方法
人体DNA的提取可以从多个来源进行,其中常见的是从血液中提取。血液DNA提取的方法主要包括以下几个步骤:
1、 血液采集:通过静脉采集一定量的血液样本。
2、 血液处理:将血液样本离心分离,得到血浆和红细胞。血浆中含有白细胞,其中包含了DNA。
3、 细胞破碎:使用细胞裂解液将白细胞破碎,使DNA释放到溶液中。
4、 DNA沉淀:加入盐溶液和酒精使DNA沉淀下来。
5、 DNA纯化:通过离心和洗涤的步骤,去除杂质,得到纯净的DNA。
人体DNA的应用
人体DNA的提取为许多领域的研究和应用提供了重要的基础。以下是几个常见的应用:
1、 疾诊断:通过分析人体DNA,可以检测出一些遗传性疾和突变,帮助进行准确的诊断和治疗方案的制定。
2、 亲子鉴定:通过比较父母和子女的DNA序列,可以确定亲子关系,用于、家族关系确认等。
3、 基因组研究:人体DNA的提取和测序可以用于研究基因组的结构和功能,帮助科学家深入了解基因在健康和疾中的作用。
人体DNA提取的注意事项
在进行人体DNA提取时,需要注意以下几点:
1、 采集血液样本时要注意卫生,避免污染。
2、 使用的试剂盒和设备进行操作,确保提取的DNA质量。
3、 遵循实验的安全操作规范,减少交叉污染和误差。
,人体DNA的提取是一项关键的技术,它在医学和科学研究中有着广泛的应用。通过提取人体DNA,我们可以更好地了解基因和遗传信息,为疾诊断和基因研究提供有力支持。
二、人体哪些部位可以提取dna
DNA亲子鉴定即STR分型检测一般实验对样本的要求:细胞数量≥106个,DNA含量>20ng/µl,体积大于20µl。对于人体组织块样本是怎样提取DNA的呢?
a)取适量组织块,用纯水冲洗;
b)剪碎(或研磨成碎块),加入1 mL STE提取液(100 mmol/L NaCl,10 mmol/L Tris-HCI,1 mmol/LEDTA,pH8.0),混匀后加入20% SDS 75 µL,10 mg/mL蛋白酶K 40 µL,于56℃酶解至清;
c)于1.5 mL离心管中加入200 µL 10% Chelex 100(100-200目),加入上述酶解后溶液20 µL,混匀;
d) 56℃保温30 min;
e)剧烈振荡5-10 s;
f)沸水煮8 min;
g)剧烈振荡5-10 s;10,000-,000 r/min离心3 min;取上清液用于扩增反应;
h) 2-8℃保存或冻存剩余DNA,再次使用时重复步骤g)。
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二、人基因组dna提取
提取
dna
的方法
DNA
提取是生物学和遗传学研究中的一项重要技术,它可以帮助科学家们获
取生物体内的
DNA
样本,为后续的实验和分析提供基础。在实验中,有多种方
法可以用来提取
DNA
,每种方法都有其特定的优势和局限性。下面将介绍几种常
用的
DNA
提取方法。
首先,我们来介绍化学法提取
DNA
的方法。这种方法利用化学试剂来破坏细
胞膜和核膜,释放出
DNA
分子。通常,这种方法需要用到蛋白酶来分解蛋白质,
破坏细胞壁。接着,利用酚
/
氯仿提取法来分离
DNA
和其他细胞组分。更后,通过
酒精沉淀法将
DNA
沉淀出来。这种方法操作简单,适用于大多数细胞类型,但是
可能会导致
DNA
的质量和纯度较低。
其次,机械法提取
DNA
的方法也是一种常用的技术。这种方法利用机械力来
破碎细胞膜,释放出
DNA
。常见的机械法包括玻璃珠破碎法和超声波破碎法。玻
璃珠破碎法通过在样品中加入玻璃珠,利用高速旋转来破碎细胞膜。而超声波破碎
法则是利用超声波的机械振动作用,破坏细胞结构。这种方法操作简单,适用于大
多数样品,但需要注意的是,过度的机械力可能会导致
DNA
断裂,影响后续实验
的结果。
另外,离心法提取
DNA
的方法也是一种常用的技术。这种方法利用离心机来
分离
DNA
和其他细胞组分。首先,将样品进行离心,使得细胞被分离出来。然后,
利用蛋白酶和盐溶液来消化蛋白质和细胞壁。更后,通过酒精沉淀法将
DNA
沉淀
出来。这种方法可以得到较高质量和纯度的
DNA
,适用于需要高质量
DNA
的实
验。
更后,磁珠法提取
DNA
的方法也是一种高效的技术。这种方法利用表面修饰
的磁珠来结合
DNA
,然后利用磁场将
DNA
磁珠复合物分离出来。这种方法操作
简便,可以自动化进行,适用于高通量的
DNA
提取。
三、人类dna提取实验报告
从血液中提取DNA的方法有很多,有更传统的酚-氯仿法,也有后来改良的试剂盒方法,选择合适的提取方法,要综合考虑操作时间、提取效率以及性价比。我们收集了常见的全血DNA提取方法,并对它们的性能做出一个简单的评估。
酚-氯仿法
1、加入5倍红细胞裂解液去除红细胞,此步骤一般需要15-30分钟;
2、加入细胞裂解液、蛋白酶K,混匀,置于50℃水浴3小时;
3、将消化好的液体移入1.5 ml EP管中,加入等体积饱和酚,混匀,10 rpm离心5分钟;
4、吸取上清转入另一EP管中,加入等体积的酚氯仿(饱和酚和氯仿醇1:1),混匀,10 rpm离心5分钟;
5、将上清液转入另一EP管中,加入1/10体积的NaAC(醋酸钠)和等体积的异丙醇(或2倍体积的乙醇),混匀,置于-20℃冰箱中3小时;
6.10 rpm,10分钟,弃去上清;
7、加入1 ml70%乙醇,温和摇晃几次,10 rpm,10分钟,弃去上清;
8、用70%乙醇重复洗涤1次;
9、将洗涤好的DNA置于超净工作台干燥10分钟;
10、加入50-80 μl TE或去离子水溶解沉淀DNA,置于-20℃保存。
酚-氯仿法抽提DNA的原理是通过有机溶剂抽提,去除蛋白,多糖,酚类等杂质,再加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。其优点是不限制初始样本量,缺点是其试剂对人体有毒害作用,且操作繁琐,耗时很长,所以酚-氯仿法基本被现在的试剂盒方法取代。
QiagenQIAamp DNA Blood Mini Kit法(适用于200μl全血)
1、在1.5 ml离心管底部加入20 μl蛋白酶k,加入200 μl全血样本;
2、加入200 μl的Buffer AL,旋涡震荡15秒;
3.56℃水浴10分钟;
4、短暂离心收集离心管盖上的液体;
5、添加200 μl无水乙醇,旋涡震荡15秒混匀,短暂离心收集离心管盖上的液体;
6、过吸附柱,8000 rpm离心1分钟,弃滤液;
7、加入500 μl Buffer AW1,8000 rpm离心1分钟,弃滤液;
8、加入500 μl Buffer AW2,10 rpm离心3分钟,弃滤液;
9、更高速离心1分钟;
10、加入100-200 μl洗脱液,温静置1分钟,8000 rpm离心1分钟,将DNA洗脱下来。
Tiangen血液基因组DNA提取试剂盒法(适用于200μl全血,大于200μl要加细胞裂解液)
1、取200μl抗凝全血,加入200μl缓冲液GB和蛋白酶K,混匀,56℃水浴10分钟;
2、温放置2-5分钟后加入350μl缓冲液BD,充分混匀;
3、过吸附柱,12000 rpm离心30秒,弃滤液;
4、加入500 μl缓冲液GDB,12000 rpm离心30秒,弃滤液;
5、加入600 μl缓冲液PWB,12000 rpm离心30秒,弃滤液,重复洗涤一次;
6.12000 rpm离2分钟,弃废液,吸附柱温静置2分钟;
7、加入50-200 μl洗脱液,温静置2分钟,12000 rpm离2分钟,将DNA洗脱下来。
1、取300 μl Bufer L1于1.5 ml离心管,加入 μl抗凝全血,旋涡震荡30秒;
2、加入300 μl Bufer L2、旋涡震荡30秒;
3.13000 rpm离心2分钟;
4、取离心上清倒入核酸纯化柱,12000 rpm离心30秒,弃滤液;
5、加入500 μl Buffer WA洗涤一次,12000 rpm离心30秒,弃滤液;
6、加入600 μl Buffer WB洗涤一次,12000 rpm离心30秒,弃滤液;
7.10 rpm离心1分钟;
8、加入100-200 μl洗脱液,温静置1分钟,12000 rpm离心30秒,将DNA洗脱下来。
以下是某一检测公司对上述三款试剂盒从操作时间、提取效率以及价格这三个性能方面做出的测评。
总结如下:
2、从提取的DNA纯度上看,三个厂家的产品获得的DNA纯度都在1.8左右,差别不大。
4、从产品报价上看,Qiagen产品提取一次血液中的DNA需要35.4元——实在是太贵了;Tiangen的更便宜,7.5元一次。
四、人dna提取方法的种类
人体基因组
DNA
提取
——整理:张桂铭
实验原理
哺乳动物的一切有核细胞都可以用来制备
DNA
,除特殊
要求外,白血球、肝或脾组织是更常用的材料。原始材料较
少或较难获得时(如羊水细胞)
,还必须经过细胞培养来获
得足够量的细胞;有时为了简便易行起见,还可以无创伤地
采集材料,如用口腔上皮脱落细胞、发根细胞。根据材料来
源不同,采取不同的材料处理方法,而后的
DNA
提取方法大
体类似,
但都应考虑以下原则:
(
)
防止和抑制
DNase
对
DNA
的降解;
(
2
)尽量减少对溶液中
DNA
的机械剪切破坏,保持
DNA
分子的完整;
(
3
)将蛋白质、脂类、糖类等物质分离干
净。
一.
试剂盒提取,见
excel
表格所列
二.
传统提法
血液中
DNA
的提取方法
(
)
将冰冻的血在温下溶化;
(
2
)
取
1ml
血液转入一无菌的
2ml
离心管中,加入等体
积的
PBS
磷酸盐缓冲液,充分混匀后
12000rpm
离心
5min
,
弃上清;
(
3
)
加入
667µl STE,24µl
的
20%
的
SDS
,
37
℃水浴
1h
;
(
4
)
加
10µl
的
20mg/ml
的蛋白酶
K
混匀,
55
℃水浴消化
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